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NEB牌 M0202S,T4 DNA Ligase ,20,000 units DNA连接酶

  • 商品编号:01.NEB.M0202S
  • 货号:01.NEB.M0202S
  • 品  牌:NEB
  • 所得积分:332
  • DNA, RNA: DNA
  • 包装大小: S(小包装)
  • 酶、缓冲液:
  • 市场价: ¥739.00
  • 销售价: ¥665.10
  • 节省:¥73.90
  • 广州仓库:无现货  上海仓库:无现货  北京仓库:无现货
    (库存情况仅供参考,请来电确认准确的现货情况)
  • 预计到货期:7
  • 本商品仅供科研之用,不可用于临床

特性

■  高效连接粘性末端和平末端
■  T/A 克隆
■  dsDNA 切刻修复
■  构建高丰度克隆文库
■  RNA 和 DNA 的连接

概述

该酶催化双链 DNA 或 RNA 上相邻的 5´-磷酸末端和 3´-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平齐末端或粘性末端之间的连接,还可以修复双链 DNA、RNA 或 DNA/RNA 杂交双链中的单链切刻。

来源

纯化自 E. coli C600 pcl857 pPLc28 lig8。

反应条件

1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液
[50 mM Tris-HCl(pH 7.5 @ 25℃),10 mM MgCl2,10 mM DTT,1 mM ATP]。推荐 DNA 5´ 末端浓度为 0.1-1.0 μM,16℃ 温育。
热失活:65℃ 10 分钟。

质保声明

T4 DNA 连接酶经过严格的质控检测,确保该产品具有最高的活性和纯度。详情请登 www.neb.com

或 www.neb-china.com

单位定义(粘性末端活性单位)

1 单位指在 20 μl 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液中,16℃ 反应条件下,30 分钟能使 50% 的经 HindⅢ 消化的λDNA 片段 [ 5´ 端浓度为 0.12 μM(300 μg/ml)] 连接所需的酶量。

浓度

400,000 units/ml 和 2,000,000 units/ml。

注意事项

与 E. coli DNA 连接酶需要 NAD+ 作辅因子不同,T4 DNA 连接酶的辅因子是 ATP。


稀释后的 T4 DNA 连接酶应于 -20℃、50% 甘油贮存缓冲液(稀释缓冲液 A,NEB #B8001)中保存。如稀释后马上使用,也可用 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液稀释。


只要在反应体系中补加 1 mM ATP,连接反应就可以在 NEB 提供的四种限制性内切酶缓冲液或在

T4 DNA 多聚核苷酸激酶反应缓冲液中进行。


NEB内切酶使用攻略

NEB内切酶攻略(一)酶切反应条件的优化 

      http://gmall.genetimes.com.cn/?article-296.html

NEB内切酶攻略(二)双酶切反应

      http://gmall.genetimes.com.cn/?article-297.html

NEB内切酶攻略(三)限制性内切酶实验问题指南

      http://gmall.genetimes.com.cn/?article-298.html

NEB内切酶攻略(四)星号活性(特异性降低或改变)

      http://gmall.genetimes.com.cn/?article-299.html

NEB内切酶攻略(五)高保真限制性内切酶 

      http://gmall.genetimes.com.cn/?article-300.html

NEB内切酶攻略(六)克隆概述

      http://gmall.genetimes.com.cn/?article-301.html

NEB内切酶攻略(七)提高转化效率

      http://gmall.genetimes.com.cn/?article-302.html

NEB内切酶攻略(八)克隆问题解决指南

      http://gmall.genetimes.com.cn/?article-303.html

NEB内切酶攻略(九)转化反应问题解决指南

      http://gmall.genetimes.com.cn/?article-304.html

NEB试剂使用攻略(十)PCR 优化的一般指导原则 

      http://gmall.genetimes.com.cn/?article-305.html

NEB试剂使用攻略(十一)PCR 问题解决指南 

      http://gmall.genetimes.com.cn/?article-306.html

 


提问
非会员顾客 说: 14-07-05 17:24
本实验的酶的体积配方是?我是初次使用,1ul的TA连接酶连接70ng 的DNA
回答
管理员[admin]  回复: 14-07-07 14:16
您好,酶的连接体系如下: COMPONENT 20 μl REACTION 10X T4 DNA Ligase Buffer* 2 μl Vector DNA (4 kb) 50 ng (0.020 pmol) Insert DNA (1 kb) 37.5 ng (0.060 pmol) Nuclease-free water to 20 μl T4 DNA Ligase 1 μl
提问
非会员顾客 说: 14-07-05 17:21
这个酶再连接时可以4度过夜?
回答
管理员[admin]  回复: 14-07-07 14:12
您好,酶的反应条件如下: 1X T4 DNA 连接酶反应缓冲液 [50 mM Tris-HCl(pH 7.5 @ 25℃),10 mM MgCl2,10 mM DTT,1 mM ATP]。推荐 DNA 5´ 末端浓度为 0.1-1.0 μM,16℃ 温育。 热失活:65℃ 10 分钟。
回答
管理员[何顺漪]  回复: 14-07-08 15:48
如果是定向连接的话,是可以的。

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