特性
■ DNA 和 RNA 5' 末端的去腺苷化
■ Aprataxin 依赖的 DNA 修复检测
■ 分析双核苷四磷酸
概述
酵母 5' 去腺苷化酶是组氨酸三聚体 (HIT) 家族中的一员,属于组氨酸三聚体核苷结合蛋白(Hint) 的分支。它是 aprataxin 在酵母中的直系同源物。人 aprataxin 的突变会导致神经系统疾病如共济失调性动眼神经失用症。通过从 DNA 的 5' 末端去除 AMP (AMP-DNA 水解酶活性) ,人源 5' 去腺苷化酶可以去除未连接中间体,它还可以通过去除3' -磷酸和 3' -磷酸乙醇酸修复 DNA 的 3' 末端损伤。人 aprataxin 作用于小分子,如核苷多磷酸双腺苷四磷酸 (AppppA) 和 lysyl-AMP。
5' 去腺苷化酶是由酿酒酵母 (S. cerevisiae ) 的 HNT3 基因编码。NEB 研究显示该蛋白能从 DNA 和 RNA的 5' 末端去腺苷化,余下 5' 末端磷酸。它也能切割 AppppA 生成 ATP 和 AMP。未见其对 Lysyl-AMP 有任何作用。
来源
从携带编码酿酒酵母 5' 去腺苷化酶质粒的 E.coli 菌株中纯化而得。
反应条件
20 μl 反应体系:1X NEBuffer 2 [50 mM NaCl,10 mM Tris-HCl,10 mM MgCl2,1 mM DTT
(pH 7.9 @ 25°C)],5–50 pmol 腺苷酸化的 DNA(AMP-DNA),30°C 温育。
单位定义
1 单位指 30℃ 条件下,10 分钟从 5' 腺苷化 DNA 寡聚体中去除 10 pmol AMP 所需的酶量。
浓度
20,000 units/ml。